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NOD-SCID小鼠
发布时间:2019-10-23 13:51:57 | 浏览量:1376

来源:

通过基因编辑技术,在非肥胖性糖尿病小鼠(NOD)品系上引入 Prkdc(Protein kinase, DNA activated,  catalytic polypeptide,又名 scid)基因突变,从而建立的新型免疫缺陷小鼠。

 

特征:

  • NOD-SCID 小鼠既拥有 C.B-17 SCID 小鼠的特征,缺乏适应性免疫系统,不再发生自发免疫性糖尿病,同 时还表现出 NOD 小鼠所具有的多种固有免疫缺陷,包括NK细胞活性低、没有溶血补体活性,骨髓发育缺 陷,是一种更易于异种移植成功并可稳定应用的动物模型。

  • NOD-SCID 小鼠的寿命一般为8-9个月,因此不适用于长期移植实验。

 

用途:

(1)同种和异种肿瘤移植:血清免疫球蛋白 Ig 泄漏率低于 SCID 小鼠,肿瘤成活率高。

(2)血液学实验研究:建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究等研究。

(3)免疫学及炎症研究。 

(4)糖尿病和肥胖研究:I型糖尿病。


生长曲线:

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生理生化数据:


NOD-SCID小鼠淋巴细胞和NK细胞验证:

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取6周龄 NOD-SICD 小鼠外周血进行流式细胞检测, 结果显示 NOD-SICD 小鼠几乎没有 T、B 细胞,NK 细胞比例较高。

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胸腺严重发育不全,胸腺被膜下脂肪细胞浸润,淋巴细胞稀少。脾基本结 构消失,无明显白髓区、脾小体,几乎无淋巴细胞。


基因鉴定报告

样本信息和目的:

微信截图_20210923094839.jpg

方法和结果:

PRKDC(Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide,DNA 依赖性蛋白激酶,又名 scid)能识别和传 递 DNA 断裂损伤信号,当细胞 DNA 发生断裂损伤后,PRKDC 复合物就聚合在损伤位点上,随之蛋白激酶 被活化,募集并磷酸化其下游的 DNA 修复蛋白启动 DNA 断裂修复。此外,PRKDC 在维持端粒稳定性,免 疫蛋白质的位置特异性重组中也发挥重要的作用。Prkdc 基因位于小鼠 16 号染色体上,有 87 个外显子。

微信截图_20210923094855.jpg


查询 Prkdc 基因的转录本信息进行各外显子序列的检测,结果发现 Prkdc 基因有多个转录本,选择转录本 Prkdc-201 ENSMUST00000023352.8(如图 2)为模板进行引物设计、和测序比对: http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Transcript/Sequence_cDNA?db=core;g=ENSMUSG00000022672;  r=16:15637889-15842235; t=ENSMUST00000023352以 Prkdc 基因DNA为模板,设计 86 个外显子的扩增测序引 物,并把 PCR 产物进行 Sanger 测序,并于报告模板进行比对,结果显示 Prkdc 基因 85 号外显子显示出一个碱 基的改变,其他有少量由于产物两端测序质量不好导致的序列不拟合被忽略掉。

微信截图_20210923094904.jpg

Prkdc 基因 85 号外显子发生单核苷酸改变(T 突变为 A)后,提前引入终止密码子,导致蛋白翻译提前终止。 碱基突变后 PRKDC 蛋白预测将截短 83个氨基酸。


结论:

斯贝福(北京)生物技术有限公司 NOD-SCID 小鼠的基因编辑类型为:Prkdc 基因 85 号外显子单碱基发生突 变,提前引入终止密码子,导致蛋白翻译提前终止。

 
 
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